AT7867

MCE 国际站：AT7867

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-12059

CAS：857531-00-1

纯度：99.88%

存储条件：Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 2 years -20°C 1 year

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：AT7867 是一种 ATP 竞争性的 Akt1/Akt2/Akt3 和 p70S6K/PKA 抑制剂，IC50 分别为 32 nM/17 nM/47 nM 和 85 nM/20 nM。

体外：AT7867 对 AKT2 的抑制作用显示为 ATP 竞争性，Ki 为 18nM。AT7867 还显示出对结构相关的 AGC 激酶 p70S6K 和 PKA 的强效活性，但对来自其他激酶亚家族的激酶显示出明显的选择性窗口。体外生长抑制研究表明，AT7867 可抑制多种人类癌细胞系的增殖。AT7867 似乎在抑制 MES-SA 子宫、MDA-MB-468 和 MCF-7 乳腺癌以及 HCT116 和 HT29 结肠细胞系中的增殖方面最有效（IC50 值范围为 0.9-3 μM），而在测试的两种前列腺细胞系中效果最差（IC50 值范围为 10-12 μM）[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

体内：体内：口服 20 mg/kg 后，AT7867 从血浆中消除的情况似乎与静脉注射后相似。口服 20 mg/kg 后，AT7867 的血浆水平至少在 6 小时内保持在 0.5 μM 以上。假设静脉注射后的药代动力学为线性，则口服途径的生物利用度计算为 44%。因此，使用此模型进行体内药效学 (PD) 生物标志物研究。在药代动力学和耐受性研究之后，将 AT7867 剂量（90 mg/kg 口服或 20 mg/kg 腹腔注射）施用于患有 MES-SA 肿瘤的无胸腺小鼠，并随时间监测肿瘤中 GSK3β 和 S6RP 的磷酸化状态。在用 AT7867 治疗后 2 小时和 6 小时，可以明显抑制两种通路活性标志物的磷酸化。到 24 小时后，GSK3β 和 S6RP 的总水平均大幅降低[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

动物实验：使用雄性无胸腺 BALB/c 小鼠 (nu/nu)。将单剂量 AT7867 以 5 mg/kg 静脉注射 (iv) 和 20 mg/kg 口服 (po) 的剂量施用于 BALB/c 小鼠。在以下每个时间点从重复动物中采集血浆样本：静脉注射后 0.083、0.167、0.33、0.67、1、2、4、6、16 和 24 小时，以及口服给药后 0.25、0.5、1、2、4、6 和 24 小时。通过心脏穿刺对小鼠进行放血，并将所有血液样本离心以获得血浆，然后在 -20°C 下冷冻直至分析。对于生物分析，所有血浆样本均通过用含有内标的乙腈进行蛋白质沉淀来制备。样品提取物的定量是通过与使用 AT7867 构建的标准校准线进行比较并使用抑制剂特异性液相色谱串联质谱 (LC-MS/MS) 方法进行的。确定药代动力学参数。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：将细胞以每孔 16,000 个细胞的密度接种于 96 孔微孔板中，培养基中添加 10% FBS，培养 24 小时后用 AT7867 处理。将 AT7867 或载体对照加入细胞中 1 小时。随后，用 3% 多聚甲醛、0.25% 戊二醛、0.25% Triton-X100 固定细胞，用含 0.1% Tween-20 (TBST) 的 Tris 缓冲盐水中的 5% 牛奶清洗和封闭，然后用磷酸化 GSK3β（丝氨酸 9）抗体孵育过夜。然后清洗微孔板，添加二抗，并使用 DELFIA 试剂增强信号。将铕计数标准化为蛋白质浓度，并使用非线性回归分析和 S 形剂量反应（可变斜率）方程 [1] 在 GraphPad Prism 中计算每种抑制剂的 IC50 值。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：AKT2、PKA、p70S6K 和 CDK2/cyclinA 的激酶测定均采用放射性滤光片结合形式进行。测定反应在化合物存在下进行。对于 AKT2，将 AKT2 酶和 25 μM AKTide-2T 肽 (HARKRERTYSFGHHA) 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 原钒酸钠、1 mM DTT、10 μg/mL BSA 和 30 μM ATP (1.16 Ci/mmol) 中孵育 4 小时。对于 PKA，将 PKA 酶和 50 μM 肽 (GRTGRRNSI) 在 2 mM MOPS (pH 7.2)、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正钒酸盐、1 mM DTT 和 40 μM ATP (0.88 Ci/mmol) 中孵育 20 分钟。对于 p70S6K，将 p70S6K 酶和 25 μM 肽底物 (AKRRRLSSLRA) 在 10 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、1 mM MgCl2、0.01% β-巯基乙醇、0.1 mg/mL BSA、0.001% Brij-35、0.5% 甘油和 15μM ATP (2.3 Ci/mmol) 中孵育 60 分钟。对于 CDK2，将 CDK2/cyclinA 酶和 0.12 μg/ml 组蛋白 H1 在 20 mM MOPS、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EDTA、15 mM MgCl2、1 mM 正钒酸钠、1 mM DTT、0.1 mg/ml BSA 和 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol) 中孵育 4 小时。通过添加过量的正磷酸来停止检测反应，然后将停止的反应混合物转移到 Millipore MAPH 滤板中并过滤。然后清洗滤板，添加闪烁剂并通过 Packard TopCount 上的闪烁计数测量放射性。使用 GraphPad Prism 软件从重复曲线计算 IC50 值。进行 AKT1 和 3 酶测定，同时进行所有其他酶测定[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

参考文献：

[1]. Grimshaw KM, et al. AT7867 is a potent and oral inhibitor of AKT and p70 S6 kinase that induces pharmacodynamic changes and inhibits human tumor xenograft growth. Mol Cancer Ther, 2010, 9(5), 1100-1110.

品牌介绍:
•   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；
•   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；
•   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；
•   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；
•   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；
•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；
•   产品的生物活性多经各国客户实验验证；
•   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；
•   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；
•   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。