生物分析中蛋白质、多肽及寡聚核苷酸样品制备、除盐耗材介绍

王灼维

沃特世科技（上海）有限公司

LC-MS是蛋白质表征的强有力工具。反向HPLC/UPLC液相分离和质谱联用技术是最常用的分离模式，这种分离模式也是蛋白质除盐的有效方法。生物制品及蛋白质溶液经常储存在一定盐离子浓度的缓冲溶液中，如PBS(磷酸盐缓冲溶液)。这些盐溶液，能和蛋白质形成加和离子，使数据解析更加复杂，同时，这些盐类也抑制了ESI-MS分析时的离子化效率。因此，质谱分析之前，蛋白质的非挥发性盐类的去除是重要的一步。沃特世公司的MassPREP^TM 在线脱盐小柱（2.1X10 mm，Part  number186004032）为客户提供了简单易行，快速（小于5分钟的液相梯度，如图1），及重现性高的有效脱盐方法[1]。并成功应用于12KDa~150KDa分子量范围的完整蛋白质的脱盐LC-MS分析（如图2）展示了这种除盐柱用在细胞色素 C（分子量约12KDa），牛血清白蛋白BSA(分子量约62KDa)，和IgG（分子量约150KDa）的除盐效果，而且柱容量可高达10微克^[2,3,4]。

在蛋白质肽段及寡聚核苷酸的除盐分析方面，沃特世的OASIS HLB(Hydrophili Lipohilic Balance) 96-孔微洗脱板（Part  number 186001828），是以亲水（20%N-乙烯吡咯烷酮）-亲脂性（80%二乙烯基苯）共聚体为填料的固相萃取96孔板[5]。乙烯吡咯烷酮使填料

具有水的可浸润性，二乙烯基苯具有反向保留能力，所以此款产品对酸性和碱性的蛋白质多肽及寡聚核苷酸均具有更高的选择性和灵敏度-即便填料在吸附过程中干涸也不例外^[5]。用此款产品对蛋白质多肽及寡聚核苷酸进行LC-MS/MS分析前的脱盐处理，可以极大降低LC-MS/MS分析的机制效应，提高检测灵敏度，而且其pH应用范围宽至1-146。OASIS HLB96-孔微洗脱板吸附寡聚核苷酸的柱容量从1pmol高至5000 pmol。

参考文献

(1) Waters Instrucion Sheet of UPLC Intact Mass AnalysisApplication Kit, November 2007, 715001664 Rev A VW-PDF.

(2) T homas E. W., Paul R. R., Beth L. G., Ziling Lu, Laetitia C.,Jeffrey R. M., Fast On-Line Desalting of Proteins for Determination of Structural Variation Using Exact Mass Spectroscopy, 2007, Vol.6,No.1: 55-59.

(3) T homas E. W., Paul R. R., Beth L. G., Ziling Lu, Laetitia C.,Jeffrey R. M., Fast On-Line Desalting of Proteins for Determination of Structural Variation Using Exact Mass Spectroscopy, Waters Application notes, June 2009, 720002292EN, LB-UM.

(4) Paul D. R., T homas E. W., Desalting of Proteins Using MassPREP^TMOn-Line Desalting Cartridges Prior to Mass Spectrometery.Waters Application notes, 720001077EN.

(5) 沃特世2011/2012液相色谱柱及消耗品简要指南，7-11.

(6) Martin G., Alexei B., Bing H. Wang, High-t hroughput biopolymer desalting by solid-p hase extraction prior to mass spectrometric analysis, 2001, Journal of Chromatography A, 921:3–13.

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