牛痘病毒加帽酶 产品简介-自主发布-资讯-生物在线

牛痘病毒加帽酶 产品简介

作者:北京百奥创新科技有限公司 2023-02-23T11:30 (访问量:8044)

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加帽反应(反应体系20 μL

本步骤适用于10μg RNA≥ 100 nt)的加帽反应,且可根据实验需要放大。

1. 10μg RNA1.5 mL离心管,使用无核酸酶的水稀释至9.5 μL

2. 65加热5 min

3. 取出离心管置于冰上5 min

4. 依次加入以下组分:

组分

体积

Denatured RNA

9.5 μL

10×Capping Buffer

2.0 μL

Murine RNase inhibitor(40 U/μL)

0.5 μL

GTP (10 mM)

1.0 μL

SAM (10 mM, fresh)

1.0 μL

Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μL)

5.0 μL

Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μL)

1.0 μL

【注】:10×Capping Buffer(Cat# 10666)0.5 M Tris-HCl, 50 mM KCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT pH 8.0 @ 25°C

5. 37°C孵育2 h

6. RNA加帽完成,可进行后续实验。

注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;

2. 所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬;

3. 在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5'末端的二级结构;

4. 对于已知5'末端结构的RNA,可以延长反应时间至4 h,提高加帽效率

5. 5'末端标记反应体系中,GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。

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产品描述

真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构,即帽子结构,该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,其由D1D12两个亚基组成,兼具RNA三***酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性,可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA5'末端(m7Gppp5'N)。牛痘病毒加帽酶,在合适浓度的加帽缓冲液(Capping buffer),鸟苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在条件下,能够在一个小时之内对RNA进行加帽,并且保证正确的方向。

本品以无菌液体形式提供,可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA5'末端标记反应。

产品性质

来源(Source

携带牛痘病毒加帽酶基因的E. coli

最适温度(Optimum Temperature

37℃

储存缓冲液(Storage Buffer

20mM Tris-HCl pH 8.0100 mM NaCl1 mM DTT0.1 mM EDTA0.1% Triton X-10050%甘油

活性单位定义(Unit Definition

37℃条件下,1小时内将10 pmol GTPα- 32P)掺入到一条含80个核苷酸(80nt)转录产物上所需要的酶量,即为1个单位。

产品组分

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