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百萤课堂-------钙黄绿素红钠盐实验方案

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-05-09T00:00 (访问量:2650)

1.百萤 钙黄绿素红钠盐参数:

E x (nm)      562

E m (nm)      576

     825.44

         Water

存储条件     在零下15度以下保存,避免光照

2. 百萤 钙黄绿素红钠盐简介 

钙黄绿素AM是最流行的荧光探针之一,用于标记和检测活细胞的细胞功能。但是,钙黄绿素AM的单色使得无法在多色应用中使用这种有价值的试剂。例如,由于与GFP相同的颜色,不可能在结合GFP的细胞中使用钙黄绿素AM。为了解决钙黄绿素AM的颜色限制,我们开发了钙黄绿橙 ,钙黄绿 和钙黄绿 。这些新的Calcein AM类似物与Calcein AM结合使用,可以对活细胞进行多色标记和功能分析。非荧光钙黄绿素 AM可以轻松进入活细胞并水解产生强荧光钙黄绿素 染料。可以使用通用的TRITC / Cy3滤波片组检测Calcein Red 染料。 

3.百萤 钙黄绿素红钠盐实验方案

AM酯是非极性酯,很容易穿过活细胞膜,并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须特别注意,因为它们易于水解,特别是在溶液中。在使用高质量无水二甲基亚砜(DMSO)之前,应将其重新配制。DMSO储备溶液可在-20°C的环境中干燥保存,并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。

1).准备2至5 mM的AM酯高品质无水DMSO储备溶液。非离子型洗涤剂F-127有时用于增加AM酯的水溶性。

注:20%的Pluronic等体积® F-127溶液可以稀释到装载缓冲器之前加入到细胞活力指标DMSO储备溶液。终的Pluronic ® F-127的浓度为约0.02%。

2.在实验当天,将细胞活力的固体指示剂溶解在DMSO中,或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液(例如Hanks和Hepes缓冲液)中准备1至10 μM的工作溶液。对于大多数细胞系,建议终浓度为4至5 μM的细胞活力指标。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。

3.如果您的细胞中含有有机阴离子转运蛋白,则可将丙磺舒(1-2.5 mM)或亚砜并吡嗪(0.1-0.25 mM)添加到细胞培养基中,以减少去酯化指示剂的泄漏。在室温或37°C下将细胞与AM酯孵育20分钟至一小时。

注意:降低装载温度可能会减少指示器的分隔。

4.在无细胞活力指示剂的缓冲液(如果适用,包含阴离子转运蛋白抑制剂)中洗涤细胞,以去除多余的探针。

注意:立即通过流式细胞仪分析细胞样品,以测定零时每个细胞的平均荧光强度,无需清洗。

5.在所需的Ex / Em波长下运行实验。


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