2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四价HPV疫苗上市申请获得NMPA受理，这也是国内自研首款四价的预防因人乳头瘤病毒所引起的宫颈癌疫苗。根据国家癌症中心基于肿瘤登记及随访监测最新数据，在JNCC上发布2022年中国恶性肿瘤疾病研究情况显示【1】，子宫颈癌位列女性癌症发病人数的前五位，发病增长率仅次于甲状腺癌，因此防治需要同时进行，以减少病人发病率和延长存活期。

图.信息源自CDE官网

宫颈癌类器官（organoids）是指利用宫颈肿瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。宫颈癌类器官可以作为疾病模型，相较于传统2D疾病模型，其在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近，能作为宫颈癌治疗、诊段和发病机制研究的理想试验模型。

宫颈癌类器官构建实验步骤

1、取材：标本离体后，尽快取材。采用无菌器械，保证无菌环境，将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的 15 mL 离心管中，4℃转运；

2、清洗：在生物安全柜中取出样品管，去除组织保存液，加入适量冷的添加有双抗的 PBS，反复清洗后，去除 PBS；

3、重复清洗：重复第 2 步骤 3 次；

4、组织处理：去除 PBS缓冲液后，将组织块移至10 cm含10 mL冷原代 组织保存液的无菌培养皿中，用无菌眼科显微剪将组织剪碎（直径约 0.5mm~1mm）；

5、重复清洗：使用常温PBS，重复第2步骤3次；

6、收集组织碎片，加入组织消化液消化20~30 min，过70 μm筛网，收集宫颈癌细胞；

7、红细胞裂解：加入10 mL红细胞裂解缓冲液，室温下在翘板摇床上摇10 min；

8、重复清洗：裂解完毕，使用常温 DMEM/F12，重复第 2步骤3次；

9、类器官种板：调整细胞密度为2~3×106，与基质胶1:1均匀混合，将细胞混悬液以40-60 uL每孔种在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入预热的类器官培养液，每个孔 750 uL；

10、类器官培养：将培养板放在 37℃  CO2培养箱培养,每2天更换培养液。加入培养液时，吸头朝向侧壁，缓慢加入；

11、类器官观察：每天观察类器官并拍照，了解初始类器官数量、增殖速度、形态、微生物污染情况等。

实验结果

注：P为代次，d为培养天数

FAQ

 Q 

基质胶的操作要注意哪些事项？

所有操作需在无菌环境下进行，应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

Q 

获取临床样本，如何避免污染？

①取材时尽量保证无菌取材；

②提取前可以用含双抗的PBS浸泡几分钟：常见与外界环境有接触可能的胃、肠、膀胱等位置肿瘤建议用含3%~5%双抗的PBS浸泡5-10 min，其他常见肿瘤用含1%~2%双抗的PBS浸泡5min左右；
③提取细胞过程中所用试剂均加1%双抗及合适浓度的原代抗生素。

Q 

肿瘤组织采集、保存、运输注意事项

尽可能多采集肿瘤细胞含量高的肿瘤组织，并缩短组织样本在空气中暴露的时间，以减少污染概率；采集的肿瘤组织样本尽快置于装有专用样本保存液的无菌管中，低温（4 ℃左右）下快速运转至检测单位（尽量保证采样后2~4 h内送到）。

Q 

病灶和癌旁培养出的类器官有区别吗？肿瘤组织的取材部位有什么要求？

有差别，肿瘤本身具有异质性，不同来源的类器官之间存在差异是很常见的现象，从形态上看，原发病灶来源的类器官比癌旁来源的类器官更具有侵袭性的结构，一般病灶形态上更加不规则一些。如果希望在建模或药物筛选方面尽量减小误差，可以在活性好的地方多位置取样。

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